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                  古朵經驗總結:確定ELISA標準曲線的吸光值的方法
                  更新時間:2023-11-23   點擊次數:213次

                    古朵經驗總結:確定ELISA標準曲線的吸光值的方法
                   

                    每個ELISA試驗都要做標準曲線,所以經常有客戶咨詢對于標準曲線的吸光值具體有什么要求,多大范圍比較合?有些人是標曲中吸光值范圍在0-1.1072,經驗豐富的科研者都建議不要超過1,濃度太大了要稀釋。那么該如何稀釋,稀釋了不就不是標曲上的那個濃度值了嗎?

                    一、依據郎伯比爾定律,在0.2~0.8吸光度值與濃度具有線性關系,盡量在這個范圍內。

                    二、在標準曲線的制作中,選擇不同濃度的標準樣品進行試驗,測定其吸光值。直到他們的相關度不是很好之前都是可以的。相關度是0.999以上。所以一般情況下,吸光值在1左右能能夠達到相關度較好的水平!

                    三、得看你的待測的樣品的不同濃度的吸光光度值,大致的落在什么范圍(用的標準曲線的方法是不適合待測樣品,有沒有沉底或者其他的不正常的現象),樣品的濃度需要提前摸索摸索,范圍拉大(如:6.25、12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000、2000等)確定好實驗所需要的濃度范圍,就是坐標曲線了。的建議就是:做3組平行樣(也包括樣品),這樣線性關系會更好。

                    四、稀釋相對而言比較容易。如配1000μg/ml的樣品,可以通過其稀釋成800、600、400.具體的如取1000的濃度4ml加入溶劑(水等)1ml可以得到800μg/ml依次類推。

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