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                  古朵生物整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧
                  更新時間:2023-11-24   點擊次數:209次

                  ??古朵生物整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧


                  ??收集整理三類樣本的技巧: 由于ELISA實驗只能檢測可溶性蛋白質的含量,因此要求樣本應清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質。為確保實驗的準確性, -20℃或-80℃保存的樣本應在1-6個月內完成檢測,4℃保存的樣本在一周內完成檢測。此外,樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,否則會造成假陰性結果??捎糜贓LISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法也不同。適當的樣本預處理是確保ELISA實驗正確性和準確性的步。這里,我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

                  ??血清

                  ??血清是ELISA實驗常用的樣本,其預處理也十分簡單。使用無熱原無內毒素的試管或離心管采集血液樣本,將試管或離心管在室內溫度下放置自然凝固(視室溫環境10分鐘到2小時不等)或4℃過夜,分離出血清,(建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面,使血清能大程度的分離出來,),2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清,立即進行測定,建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復凍融,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

                  ??注意事項:

                  ??在收集血液樣本的過程中應避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質,這種情況下,ELISA實驗中將會出現非特異性顯色反應,導致檢測結果不準確,出現假陽性結果。另外,樣本還應避免細菌污染,因為細菌可能含有內源性HRP,也會導致檢測結果不準確。

                  ??血漿

                  ??應根據標本的要求選擇EDTA、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑,使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本,采集后30分鐘內,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清液(血漿),建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成,使用前應該再次離心。

                  ??注意事項:

                  ??檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書,查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

                  ??尿液

                  ??用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

                  ??細胞培養上清

                  ??檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。將細胞培養上清液吸入離心管中并以2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),除去細胞碎片和雜質,收集上清液備用,樣本保存在-20℃或-80℃,避免反復凍融,保存過程中如有沉淀形成,使用前應再次離心。

                  ??腦脊液

                  ??用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,使用前應再次離心。(采集大鼠腦脊液)的方法:采集腦脊液時,用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚,剪去背毛暴露皮膚。兩耳連線剪一橫切口(1. 5cm左右),在其中點向尾側沿皮下剪開2cm,將皮分離兩側,擴大視野。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層,并斷端依次拉向尾側擴大視野。注意,有出血時用干紗布按壓止血,保持術口清晰。接近頸后黃韌帶時,小心地用7號注射針頭分離覆蓋的肌肉,暴露寰枕膜。用1ml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角),針斜面向上,針近水平刺入蛛網膜下腔,固定針體,緩慢抽取腦脊液,一般采集量為100-200微升。)

                  ??唾液

                  ??用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,使用前應再次離心。

                  ??ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。


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