<samp id="r66tf"></samp>

  1. <optgroup id="r66tf"><li id="r66tf"></li></optgroup><span id="r66tf"><blockquote id="r66tf"></blockquote></span>
    
    
    <acronym id="r66tf"><blockquote id="r66tf"></blockquote></acronym>
      <track id="r66tf"></track>

      <ruby id="r66tf"></ruby>
      1. <span id="r66tf"><output id="r66tf"><nav id="r66tf"></nav></output></span>

        <span id="r66tf"></span>
      2. <acronym id="r66tf"></acronym>

            <track id="r66tf"></track>
            <acronym id="r66tf"></acronym>
          1. <acronym id="r66tf"></acronym><optgroup id="r66tf"></optgroup>

          2. <optgroup id="r66tf"><li id="r66tf"><del id="r66tf"></del></li></optgroup>
            <legend id="r66tf"><li id="r66tf"></li></legend>

          3. <track id="r66tf"><i id="r66tf"></i></track>

              <ol id="r66tf"><output id="r66tf"></output></ol>

            1. <output id="r66tf"></output>
                  <ol id="r66tf"></ol>
                  18321664727
                  返回首頁 在線留言 聯系我們
                  首頁 > 技術支持 > 古朵資訊| 抗體制備:多克隆抗體的制備方法

                  技術支持

                  古朵資訊| 抗體制備:多克隆抗體的制備方法
                  更新時間:2023-11-23   點擊次數:235次

                    古朵資訊| 抗體制備:多克隆抗體的制備方法
                   

                    多抗制備的概念:由多個B淋巴細胞克隆所產生的,受到多種抗原決定簇刺激并可與多種抗原表位結合的抗體。多抗制備主要包括以下幾個步驟:免疫動物、佐劑、免疫原、免疫、取血等。

                    多抗制備的制備步驟

                  抗體 抗原 古朵 多克隆抗體 弗氏<a class=

                    一、器材

                    剪刀(剪兔毛用)一把、彎頭眼科手術鑷子(游離血管用)一把、直頭眼科手術剪(剪血管用)一把,手術刀架,手術刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附針頭,兔子固定架,滅菌三角燒瓶(200ml)或平皿(直徑18cm)、彎頭止血鉗四把,直頭止血鉗兩把,手術縫合線,塑料放血管,紗布等。

                    二、試劑

                    生理鹽水

                    弗氏佐劑

                    弗氏不佐劑

                    二甲b,酒精棉,脫脂棉,2% NaN3

                    三、免疫原

                    蛋白或KLH偶聯的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。

                    四、兔子的選擇

                    兔子的重量應在四斤以上,兩耳光滑,明顯可見耳靜、動脈,健康。

                    五、免疫

                    用生理鹽水稀釋免疫原,然后與相應的佐劑進行1:1混合??乖妥魟┗旌闲纬煞€定的乳劑,將該乳劑在兔子雙肩周圍的皮膚下進行皮下注射和后大腿進行肌肉注射。每個區域大約用1/4的免疫原。這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應答。

                    注:

                    抗原注射以前需要收集一些正常血清,已備檢測抗體時作為陰性對照。待兔子在新環境中穩定,大概需要四天左右時間,可以進行耳動脈取血。取血量約5ml足矣。

                    免疫用的抗原必須純化,否則影響抗體的質量??乖汧CA或FIA充分乳化后才能注射。將抗原液與佐劑等比例混合后,置于混合器上使之劇烈振蕩使抗原充分乳化,乳化過程比較費時、費力,但若乳化不充分,會影響免疫的效果,振蕩后,1000rpm離心一分鐘,如水相和油相不分層即可注射。免疫用FCA,以后都用FIA。

                    免疫方法可采用背部多點注射法。即于家兔脊柱兩旁選4-6點皮下注射,每點注0.1ml,間隔2周后再于上述部位選不同點注射(不要選擇臨近位點,否則潰瘍愈合不好)。每次免疫的抗原量約100μg。免疫次數在四五次即可,抗原用量大可以減少次數。

                    六、取血:

                    免疫一周后,可以耳動脈取血檢測抗體效價。因為起初幾次免疫產生的抗體的效價比較低,頭兩次取血,夠檢測用即可。在三次免疫后,可以獲得較高效價的抗體,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否則會造成兔子貧血。

                    前幾次取血用19號針頭對兔子進行耳動脈取血,室溫過夜析出血清。

                    最后一次取血可以采用頸動脈放血,具體操作如下:

                    1、家兔仰臥于兔架上固定頭部,用紗布固定四肢。頭部略放低以暴露頸部。剃毛并消毒皮膚。

                    2、沿頸部中線用手術刀切開皮膚約10cm,分離皮下結締組織,直至暴露出氣管兩側的胸鎖乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血鉗止血)。

                    3、用直頭止血鉗分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區疏松組織,暴露出頸總動脈后用彎頭眼科鑷使之游離,剝離神經和結締組織。

                    4、于動脈下套入兩根黑絲線,分別置于遠心及近心端。結扎遠心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾住。

                    5、用小拇指墊在血管下,用尖頭眼科手術剪在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口(勿剪斷),插入塑料放血管。再將近心端的絲線結扎固定于放血管上,以防放血管滑脫。

                    6、松開止血鉗,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。

                    七、血清的分離

                    如果用三角瓶或平皿盛血,將器皿傾斜放置于37oC烘箱2hr,轉移到4oC沉淀過夜,第二天早上用吸管吸取血清。如果用離心管收集,37oC烘箱放置2hr,轉移到4oC沉淀過夜,第二天早上離心,10000RCF,10分鐘。在血清中加入NaN3 至終濃度0.02%,分裝后-20oC保存。

                    小結:抗血清獲得之前要件的抗體的效價、抗體的特異性以及抗體的親和力;獲得抗血清之后,要分裝保存抗血清,一般情況下,-20度可保存數月至數年抗體的效價都不會發生變化??贵w的效價可以通過瓊脂擴散試驗和酶聯免疫吸附試驗進行鑒定。

                    抗體 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。


                  分享到:

                  返回列表 | 返回頂部
                  上一篇 : 古朵生物整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧    下一篇 :  古朵生物:ELISA試劑操作常見問題及解決方案
                  網站首頁 公司簡介 產品中心 招聘中心 技術支持 企業動態 聯系我們 管理登陸
                  上海古朵生物科技有限公司版權所有 主營:優質胎牛血清,EA36染色液配制,迪夫快速染色液
                  GoogleSitemap ICP備案號:滬ICP備19048203號-2 技術支持:智慧城市網
                  在線客服
                  91精品国产综合久久精品_国产片婬乱一级吃奶毛片视频_久久亚洲AV成人片无码_国产校花白浆视频 亚洲色资源在线精品_精品国产一区二区三区观看不卡_国产黄色网站在线观看_久久综合香蕉国产蜜臀AV 国产AV丝袜一区二区三区_亚洲欧洲精品成人久久曰影片_国产精品亚洲二区在线播放∴_国产人与动人物A级毛片 丰满人妻AV无码一区二区三区_成人无码A级毛片免费_人与牲口性恔配视频免费_午夜视频在线观看 娇妻在交换中哭喊着高潮_国产乱人伦偷精品视频免下载_永久天堂网 AV手机版_国产裸体美女视频全黄扒开 国产在线网址_aⅴ无码区国产_国产在线观看片a免费观看_中文字幕免费无码久久99