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                  知識分享:ELISA常見樣本的處理方法—組織樣本
                  更新時間:2023-10-18   點擊次數:228次

                    ELISA常見樣本的處理方法—組織樣本


                    ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。利用ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等,這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面古朵生物就常見ELISA組織樣本處理方法的整理,希望對您有所幫助。

                    組織樣本一般是制成組織勻漿,處理方法如下:

                    取適量組織塊,于預冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);

                    可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入 5-10ml預冷PBS(組織與 PBS 的質量體積比建議為 1:5,即1g 樣本加入 5ml PBS)進行充分研磨(有條件實驗室可選用機器勻漿),該過程需在冰上進行;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復 2 次)。

                    將制備好的勻漿液于5000×g 離心5分鐘,留取上清即可檢測。

                    如果樣本需要長期保存,請添加蛋白酶抑制劑。根據實驗需要,組織勻漿樣本可先定量總蛋白,以便于統計分析數據。某些組織樣本如肝臟,腎臟,腦組織會有假陽性反應。

                    處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復凍融,樣本處理之后可分裝密封保存,4℃保存應小于 1 周,-20℃不應超過 1 個月,-80℃不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫,不應加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的第一步,以上就是關于常見樣本處理方法的一個簡述,供研究者參考。

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