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                  對于抗體純化方法及實驗步驟您了解多少?
                  更新時間:2023-09-05   點擊次數:276次

                    對于抗體純化方法及實驗步驟您了解多少?


                    1.鹽析法(飽和硫酸銨沉淀法)

                    該純化方法是基于在待純化免疫血清中加入飽和硫酸銨溶液,由于抗體也是一種蛋白質,其在水溶液中的溶解度是由其本身攜帶的親水基團數和電荷數決定的,當我們向抗血清中加入飽和硫酸銨溶液后,硫酸根離子和銨根離子與抗體競爭溶液中的水分子,因為硫酸根離子和銨根離子與抗體分子相比,具有更強的親水性,因此抗體分子表面的水化膜被破壞,同時其暴露出來的帶電基團被溶液中的鹽離子所中和進而導致其溶解度大大降低,依據此原理從而將其從抗血清中分離。

                    2.正辛酸-飽和硫酸銨沉淀法

                    該純化方法原理是:正辛酸在偏酸條件下,能與抗血清中或者小鼠腹水中的雜蛋白結合,在等電點附近將其沉淀,IgG類抗體則存在于上清液中,再利用飽和硫酸銨沉淀法即可進一步提純。

                    3.Protein A和protein G純化法

                    基本原理:protein A和proteiin G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結合。Protein A和proteinG 作為配基可以被偶聯到瓊脂糖凝膠上,當抗血清從中流過時,特異性的IgG就與配基結合,其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結合能力不同,我們需要具體情況具體對待,分別選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a,IgG2b,IgG3,兔,人,豬的多克隆抗體用protein A純化,而小鼠單抗IgG1, 大鼠單抗,小鼠,大鼠,山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

                    4.免疫親和純化法

                    基本原理:將抗原作為一種配基偶聯在sepharose 4B上,血清等生物液體中的特異性抗體與sepharose 4B上的抗原進行特異性結合,其他雜蛋白和雜抗體則不被結合,通過洗滌和洗脫等一系列實驗步驟即可得到高純度的目標抗體。本方法雖然和Protein A/G均被稱為親和純化方法,但是純化得到的最終的抗體還是有很大區別的,ProteinA/G純化得到的主要是非特異性的IgG類抗體,而本方法純化得到的主要是特異性的IgG類抗體,與其他純化方法相比,本方法純化得到的抗體其特異性好,純度最高。本純化方法的實驗步驟與protein A/G純化方法基本一致,將實驗方法三的配基protein A/G換成相應的目標抗原即可。

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