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                  技術支持

                  古朵技術分享:瓊脂糖凝膠電泳制備方法及核酸檢測
                  更新時間:2023-04-27   點擊次數:436次

                    古朵技術分享:瓊脂糖凝膠電泳制備方法及核酸檢測


                    一. 實驗目的

                    1、掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;

                    2、學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。

                    二. 實驗原理

                    瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子,沸水中溶解,45℃開始形成多孔性剛性濾孔,凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

                    DNA分子在堿性環境中帶負電荷,在外加電場作用下向正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時,有電荷效應與分子篩效應。不同DNA,其分子量大小及構型不同,電泳時的泳動率就不同,從而分出不同的區帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA,主要是利用分子篩效應,遷移速度與分子量的對數值成反比關系。

                    溴化乙錠(EB)未扁平狀分子,在紫外照射下發射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復合物,其發射的熒光強度較游離狀態EB發射的熒光強度大10倍以上,且熒光強度與DNA含量成正比。

                    三、儀器和試劑

                    儀器: 微量移液器,電泳儀,電泳槽,微波爐

                    試劑: 瓊脂糖:1.0%;電泳緩沖液(50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g ,冰醋酸5.7ml , 0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ,加蒸餾水至100ml ) EB:5 ?l / 100 ml TBE

                    電泳材料:標準分子量核酸(DL2000)

                    四. 操作步驟

                    (1)制膠(以20 mL為例)

                    a. 稱取0.2 g 瓊脂糖,加入20 ml 的1XTAE緩沖液(pH 8.0),搖勻;

                    b. 微波爐加熱,至瓊脂糖wan全溶解(要防止過熱溢出三角瓶);

                    c.將制膠板放入制膠槽中,插入適當的梳子,將溶解的瓊脂糖(約50℃)加入2ul EB后,混均勻,倒入其中,直至厚度為4~6 mm(如有氣泡要把氣泡趕出),在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min);

                    d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。

                    (2)點樣

                    用微量移液器將5 ?l含藍色染液的 DL2000 加入點樣孔下部。

                    (3)電泳

                    打開電源開關,調節電壓至3~5 V/cm(約100 V),可見到溴酚藍條帶由負極向正極移動,約30-40分鐘后即可觀察結果。

                    (4)觀察

                    將電泳好的膠置于紫外透射檢測儀上,打開紫外燈,可見到橙紅色核酸條帶,根據條帶粗細,可粗略估計該樣品DNA的濃度。如同時有已知分子量的標準DNA進行電泳,則可通過線性DNA條帶的相對位置初步估計樣品的分子量。

                    五、實驗結果

                    點樣時效果較好的照片點出的白色熒光線比較亮,條帶粗細均勻;條帶沒有出現兩端粗中間細的情況

                    瓊脂糖凝膠上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。



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