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                  血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳實驗原理您了解嗎?
                  更新時間:2022-09-14   點擊次數:840次

                    標簽:血清脂蛋白瓊脂 凝膠電泳 古朵生物


                    血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳實驗原理您了解嗎?


                    原 理:

                    將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進行預染。再將預染過的血清置于瓊脂糖凝膠板上進行電泳分離。通電后,脂蛋白向正極移動,并分離為幾個區帶。

                    操 作:

                    1.預染血清:血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml于小試管中,混合后置37℃水浴染色30分鐘,然后離心(2000轉/分,約5分鐘)。

                    2.制備瓊脂糖凝膠板:將已配制的0.45%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化,用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片,每片2.5ml,靜置約半小時后凝固(天熱時需延長,可放冰箱數分鐘加速凝固)。

                    3.點加血清:已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cm處,用切口刀片垂直切入凝膠后立即取出,然后用銅絲小匙將長方小條凝膠取出。以小片濾紙吸干小槽中水分,用血色素吸管吸取經過預染的血清約15μl,注入凝膠板上的小槽內。

                    4.電泳:將加過血清的凝膠板平行放入電泳槽中,樣品應在陰極一端。兩塊三層紗布于巴比duo緩沖液中浸潤,然后輕輕緊密貼在凝膠板兩端,紗布的另一端浸于電泳槽內的巴比duo緩沖液(注意:此電極緩沖液不能用三羥甲烷緩沖液代替)。接通電源,電壓為120~130V,每片電流為3~4mA。約經電泳15至55分鐘,即可見分離之色帶。

                    結果及臨床意義:

                    1.正常人血清脂蛋白可出現三條區帶,從負極到正極依次為β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最淺)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原點處應無乳糜微粒。

                    2.如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深,結合血清甘油三酯明顯升高和膽固chun正?;蚵愿?,可以定為Ⅳ型高脂蛋白血癥。

                    3.如果β-脂蛋白區帶比正常血清明顯深染者,同時結合血清總膽guchun明顯增高、甘油三酯正常者為Ⅱa型;若結合血清總膽guchun增高而甘油三酯略高的前β略溶者為Ⅱb型。

                    4.結果β-和前β-兩區帶分離不開連在一起稱“寬β區帶",結合血清甘油三酯和膽guchun均有所增高,可定為Ⅲ型。

                    5.如果原點出現乳糜微粒,β,前β均正?;驕p低,結合血清甘油三酯明顯升高,可定為Ⅰ型。

                    注意事項:

                    1.電泳樣品要求為新鮮的空腹血清。

                    2.每一塊凝膠上可平行挖兩條小槽,因而可加兩個樣品。

                    3.如果用一形狀大小和小槽一樣的有機玻璃片,在瓊脂糖膠凝固前固定于適當位子上,當凝固后取出有機玻璃片,凝膠板上留下小槽可直接加樣,不需挖槽。

                    4.如果需要保留電泳樣本,可將電泳后之凝膠板(連同玻片)放于清水中浸泡脫鹽2小時,然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。

                    試劑與器材:

                    1.巴比緩沖液(pH8.6,離子強度0.075):為電極緩沖液

                    巴比duo15.4g,巴比duo2.76g,EDTA酸0.292g,加水溶解后加水至1000ml

                    2.三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.6)為凝膠緩沖液

                    三甲基氨基甲烷1.212g,EDTA酸0.29g,NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml

                    3.瓊脂糖凝膠

                    瓊脂糖0.45g,三痙甲基氨基甲烷緩沖液50ml,水50ml

                    加熱至沸,待瓊脂糖溶解后立即停止加熱。

                    4.挖槽工具制作

                    切口刀:刀口長15mm的刀片,中央夾一有機玻璃或木片,用螺絲固定,使兩刀片相距1.5mm。挖槽小匙:用直徑1.5mm的銅絲約6cm長,一端錘成扁平,用砂紙磨光。

                    5.電泳槽和電泳儀:同血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的儀器。

                    血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳實驗原理您了解嗎上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

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