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                  技術支持

                  瓊脂糖核酸電泳標準實驗步驟
                  更新時間:2020-05-18   點擊次數:1261次

                  1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;

                  2.根據欲分離DNA-pian段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);

                  3.放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;

                  4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結,小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內;

                  5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,如樣品孔內有氣泡,應設法除去;

                  6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內;

                  7.接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記DNA樣品由負極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負)。一般60~100V電壓,電泳20~40min即可;

                  8. 根據指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;

                  9.電泳完畢,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標準Marker比較被擴增產物的大小。

                  瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的*分辨范圍

                  瓊脂糖凝膠濃度

                  線形DNA的*分辨范圍(bp)

                  0.5%

                  1,000~30,000

                  0.7%

                  800~12,000

                  1.0%

                  500~10,000

                  1.2%

                  400~7,000

                  1.5%

                  200~3,000

                  2.0%

                  50~2,000

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